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纳米颗粒增强透射免疫比浊法检测乳酸脱氢酶同工酶3方法的建立及性能评价

作者:董奕裕; 吴奕征; 沈丽丽; 陈群乳酸脱氢酶同工酶3纳米颗粒增强透射免疫比浊法性能评价

摘要:目的建立纳米颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定乳酸脱氢酶同工酶3(LDH3)的分析方法。方法 确定最适反应条件,包括抗体浓度、胶乳微球粒径、交联剂[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)]浓度、缓冲液种类及pH值、反应时间,并建立检测血清LDH3的PETIA方法。按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP5-A2文件要求,评价方法的精密度、线性范围、回收率、抗干扰能力和分析灵敏度,并初步建立参考区间。结果 PETIA最适反应条件:抗体浓度为0.1mg/mL、胶乳微球粒径为120nm、交联剂(EDAC/NHS)浓度为10mg/mL、缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)、pH值为7.8时偶联率最佳,室温(25℃)和低温(4℃)放置24h偶联率保持不变。采用建立的PETIA检测LDH3低值(16.5U/L)、中值(65.0U/L)和高值(155.0U/L)的批内变异系数(CV)分别为5.77%、4.02%、3.77%,批间CV分别为6.59%、4.44%、3.93%;线性范围为3.6~200.0U/L;平均回收率为102.1%;900U/L类风湿因子、500μmol/L胆红素、9mmol/L甘油三酯、5g/L血红蛋白、5g/L维生素C均无明显干扰;分析灵敏度为3.6U/L;参考区间为13.5~75.9U/L。结论 建立的PETIA测定LDH3具有方法简单、快速、灵敏等优点,且结果准确,可用于全自动生化分析仪,能够满足临床检验的要求。

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检验医学

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