作者：刘超; 任丽莉; 王一曌; 刘乙蒙; 肖建英蛋白激酶1活化受体胃癌细胞增殖hgc27细胞免疫印迹法
摘要：目的 探讨活化蛋白激酶C受体1C（RACK1,GNB2L1）在胃癌细胞HGC27中的表达及过表达RACK1对HGC27生长增殖的影响。方法 体外培养胃癌未分化细胞HGC27和正常胃黏膜上皮细胞系GES-1,收集细胞48 h后,提取mRNA和蛋白,利用RT-PCR检测RACK1 mRNA在HGC27和GES-1细胞中的表达;利用Western blotting法检测RACK1蛋白在两种细胞中的表达;以人胚肾HEK293细胞c DNA为模板,构建pc DNA3.1Aflag-RACK1重组质粒,利用Lipo2000转染入HGC27细胞中,Western blotting法检测质粒的转染效率,MTT法检测过表达RACK1对HGC27胃癌细胞系生长增殖的影响。结果 HGC27胃癌细胞中RACK1的mRNA和蛋白水平表达低于GES-1细胞（P〈0.01）。双酶切鉴定和测序分析表明,pc DNA3.1A-flag-RACK1重组质粒构建成功。将该质粒转入HGC27细胞后,与未转染组相比,空载转染组RACK1蛋白表达无明显区别（P〉0.05）,pc DNA3.1-RACK1转染组RACK1蛋白表达明显升高（P〈0.01）;转染pc DNA3.1A-flag-RACK1转染组细胞存活率在72 h和96 h明显少于pc DNA3.1空载对照组（P〈0.01）。结论 支架蛋白RACK1的mRNA和蛋白水平在HGC27细胞中低表达,上调RACK1的表达可明显抑制HGC27细胞增殖。
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