作者：陈爽; 许芳; 张林波; 张喜悦; 范伟兴牛分枝杆菌fixbhspxmpb83原核表达纯化
摘要：为了给原核表达牛分枝杆菌FixB、HspX和MPB83基因并纯化FixB、HspX和MPB83蛋白，进一步研究它们在牛结核病诊断中作为特异性抗原的诊断价值及应用奠定基础，试验用PCR方法从牛结核分枝杆菌AF2122／97基因组中扩增出FixB、HspX和MPB83基因片段，构建pET-28a—FixB、pET-28a—HspX和pET-28a—MPB83重组质粒，克隆到DH50感受态细胞，提取测序正确的阳性重组质粒，转化B您1（DE3）感受态细胞，用1mmol／LIPTG于37℃诱导表达，SDS—PAGE分析目的蛋白的表达形式，Western—blot分析鉴定并用Ni—NTA层析柱纯化蛋白。结果表明：成功扩增了大小依次约为957bp、435bp和663bp的FixB、HspX和MPB83基因，将其连接pET-28a原核表达载体，原核表达的FixB、HspX和MPB83重组蛋白均以包涵体形式存在，分子质量依次约为37ku、21ku和28ku。经Western—blot鉴定表达产物为FixB、HspX和MPB83重组蛋白，Ni—NTA成功洗脱出目的蛋白。说明试验成功构建了牛分枝杆菌FixB、HspX和MPB83基因的原核表达栽体，并纯化了FixB、HspX和MPB83重组蛋白，可用于进一步的应用研究。
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