X-连锁慢性肉芽肿病的植入前遗传学诊断方法学研究

作者：吴海涛; 沈晓婷; 刘瑜亮; 钟依平; 王静; ...系谱植入前诊断多重置换扩增单体型分析

摘要：目的：采用多重置换扩增（MDA）建立一种可靠、准确的植入前遗传学诊断（PGD）方法，可应用于X-连锁慢性肉芽肿病的PGD。方法：采用16个位于CYBB基因两侧的短串联重复序列（STR）位点对X-连锁慢性肉芽肿病家系进行单体型分析，采用MDA对单细胞进行全基因组扩增，对其产物采用在家系分析中具有多态性的STR位点及特异性扩增CYBB基因进行分析，同时采用位点Amel进行性别诊断。结果：家系分析结果显示共有7个STR位点具有多态性。共进行了10个单淋巴细胞及10个单卵裂球的MDA，全部扩增成功。对致病基因CYBB外显子8的聚合酶链反应（PCR）扩增效率为100%，其中1个单淋巴细胞发生致病位点的等位基因脱扣（ADO），10个单卵裂球诊断结果均为215 bp，未检测出异常的204 bp条带，ADO率为10%（1/10）；对于7个有多态性的STR位点和位点Amel，PCR扩增效率为96.9%（155/160），ADO率为11.3%（13/115）。结论：采用MDA结合致病基因特异性扩增及单体型分析在单细胞水平对X-连锁慢性肉芽肿病进行检测，两者相结合可避免污染、ADO等导致的误诊，可提高PGD的诊断效率，为进一步的临床应用奠定了基础。

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