小鼠 Tox3 基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达

作者：崔玉倩 赵涵 马增香 赵世斗 徐海静 王文...tox3慢病毒载体粒层细胞小鼠

摘要：目的：构建重组慢病毒载体pCDH—Tox3-Flag，并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况。方法：利用DNA重组技术将小鼠Tox3~N克隆人慢病毒表达载体pCDH—MCS—T2A—copGFP—MSCV中，通过酶切、测序验证后，将重组慢病毒载体pCDH—Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2．G共转染HEK293FF细胞，包装重组慢病毒LV—Tox3-Flag，并感染小鼠原代颗粒细胞，用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测Tox3mRNA的转录水平，蛋白质印迹（Westernblot）法检测T0x3-Flag蛋白的表达情况。结果：经酶切及测序结果证实，构建了重组慢病毒载体LV—Tox3；RT—PCR及Westernblot结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后，Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白。结论：成功建立Tox3基因慢病毒表达载体LV—Tox3-Flag，包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞，并使Tox3基因得到稳定表达，为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础。

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