作者：孙敏华; 李林林; 董嘉文; 刘志成; 孙俊颖...鸭坦布苏病毒产蛋下降综合征病毒h9亚型禽流感病毒三重荧光pcr
摘要：参考GenBank上已发表的产蛋下降综合征病毒（EDSV）五邻体（penton）基因序列、H9亚型禽流感病毒的HA基因和鸭坦布苏病毒（DTMUV）E基因序列，分别设计了检测EDSV、H9AIV和DTMUV的特异性引物，扩增目的片段大小分别为110bp、281bp和266bp。通过PCR验证及引物浓度的优化，建立了针对这3种病毒的三重荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明，该方法可以同时检测EDSV、H9AIV和DTMUV，且不与鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒和大肠杆菌基因组DNA以及鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒的RNA发生交叉反应；敏感性试验表明，该方法对EDSV、H9AIV和DTMUV核酸的检测下限分别为8.0、4.8和1.3个拷贝，该方法比常规PCR方法敏感10倍；该方法重复性良好，对不同批次的样品扩增效果良好。通过标准曲线的建立以及临床样品的检测表明，该方法可以用于EDSV、H9AIV和DTMUV的定性和定量检测。
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