作者:周齐洋 张小燕胱抑素c基因克隆原核表达
摘要:目的:研究人胱抑素c(Cycstatin C,cysC)的原核重组表达及纯化。方法:通过RT-PCR扩增得到人CysC的cDNA序列,并将其构建到pET-32a(+)的表达载体中。通过转化人BL21(DE3)表达宿主茵及表达条件的优化,摸索其最佳表达条件。通过镍柱纯化以及DEAE—sepharoseFF离子交换层析的方法纯化得到重组的人cysC蛋白。结果:通过RT-PCR扩增的方法得到的cDNA序列通过测序证明与预期一致。通过优化表达,CysC的表达水平达到了160mg/L,约占总可溶蛋白的20%,表达产物通过两步纯化后获得了纯度为95%的重组Cys C。结论:成功构建cy8C原核表达系统和蛋白纯化系统,为下一步制备多克隆抗体以及开发Cysc的免疫诊断试剂奠定了基础。
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