作者：赵荣荣; 任海风; 宋乐; 张倩; 范楚苓; 刘...klf4胃癌
摘要：目的采用CRISPR／Cas9基因编辑技术，构建靶向KLF4的基因编辑质粒，建立CRISPR／Cas9．sgKLF4人正常胃黏膜GES-1细胞株，观察KLF4基因敲除效果及其对细胞生物学行为的影响。方法设计靶向KLF4基因的sgRNA序列，将合成的片段插入到CRISPR／Cas9质粒骨架载体pX459中，再将重组后的质粒做转化，挑取克隆，扩增后提质粒进行测序验证正确性。将构建好的重组质粒体外转染人人胃黏膜细胞GES-1中，利用嘌呤霉素进行筛选获得KLF4敲除的克隆细胞，应用Westernblot技术检测未转染细胞和克隆细胞中KLF4蛋白的表达情况，平板克隆实验检测KLF4敲低后克隆形成能力，MTT实验检测其增殖能力，Transwell实验检测其迁移能力。结果经测序验证，成功构建了靶向KLF4的重组质粒pX459-KLF4-sgRNA，经Westernblot方法验证，转染该重组质粒后人胃黏膜上皮细胞株GES-1的KLF4蛋白表达量明显降低，行为学实验结果表明，GES·1细胞敲低KLF4基因后克隆形成能力、增殖能力以及迁移能力都明显增强。结论成功构建了靶向KLF4的CRISPR／Cas9基因编辑质粒载体及KLF4基因敲低的稳定细胞株GES-1，KLF4基因敲低后GES-1细胞生物学行为的改变证实其抑癌基因活性。
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